计算机中Gateway是网关的意思。网关是一种充当转换重任的计算机系统或设备。在使用不同的通信协议、数据格式或语言,甚至体系结构完全不同的两种系统之间,网关是一个翻译器。

1.GATEWAY什么意思

 

计算机中Gateway是网关的意思。网关是一种充当转换重任的计算机系统或设备。在使用不同的通信协议、数据格式或语言,甚至体系结构完全不同的两种系统之间,网关是一个翻译器。与网桥只是简单地传达信息不同,网关对收到的信息要重新打包,以适应目的系统的需求。同时,网关也可以提供过滤和安全功能。大多数网关运行在OSI 7层协议的顶层--应用层。


 
网关类型:
 
1、传输:传输网关用于在2个网络间建立传输连接。利用传输网关,不同网络上的主机间可以建立起跨越多个网络的、级联的、点对点的传输连接。

2、应用:应用网关在应用层上进行协议转换。例如,一个主机执行的是ISO电子邮件标准,另一个主机执行的是Internet 电子邮件标准,如果这两个主机需要交换电子邮件,那么必须经过一个电子邮件网关进行协议转换,这个电子邮件网关是一个应用网关。

3、安全网关:安全网关是各种技术的一个有趣的集成,它具有重要和独特的保护作用,从协议级过滤到非常复杂的应用级过滤。可以说,网关是作为转换任务的计算机系统或设备。网关是两个使用不同通信协议、数据格式或语言,甚至完全不同体系结构的系统之间的转换器。

 

GATEWAY什么意思

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2.GATEWAY构建载体步骤

 

(1)创建入门克隆,通过PCR或传统的克隆方法将目的基因克隆进入门载体。

(2)混合包含目的基因的入门克隆和合适的目的载体以及Gateway LR Clonase酶,构建表达克隆。(表达克隆用来在合适的宿主中进行蛋白的表达和分析。)

 

有几种方法可以构建Gateway入门克隆。无论您选择何种方法,创建的入门克隆都是准备用来与各种目的载体进行重组。
 
(1)PCR克隆(定向TOPO克隆至入门载体或与供载体BxP重组);
 
(2)限制性内切酶消化和连接进入入门载体;
 
(3)使用pCMV·SPORT6或pEXP-AD502*构建Gateway兼容cDNA文库。

 

GATEWAY构建载体步骤

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3.GATEWAY技术原理及其应用

 

Gateway 也可以被视为一种克隆操作平台:把目的基因克隆到入门载体(Entry Vector)后就不用依赖限制性内切酶,而靠载体上存在的特定重组位点和重组酶,高效、快速地将目的基因克隆到其它的受体载体(Destination Vector,目的载体)上。

 

Gateway 的原理也是建立在噬菌体 DNA定点整合到细菌宿主基因组上。在噬菌体和细菌的整合因子(INF、Int)的作用下,lambda 的 attP 位点和大肠杆菌基因组的 attB 位点可以发生定点重组,lambda 噬菌体 DNA 整合到大肠杆菌的基因组 DNA 中,两侧产生两个新位点: atL 和 attR。这是一个可逆的过程,如果在一个噬菌体编码蛋白 Xis 和 IHF、Int 的共同介导下这两个新位点可以再次重组回复为 attB和 attP 位点,噬菌体从细菌基因组上裂解下来。这一过程的方向是受控于两个重要因素:存在的介导蛋白和重组位点。

 

在 Gateway 系统中,入门载体包含两个重组位点序列 atL1和 atL2,大小均为100bp,中间夹着一个自杀基因--ccdB 基因。由于 cedB 基因的表达产物能抑制普通的 Ecoli 生长,在克隆时没有切开或者自身环化的载体在转化时不能生长。在构建含目的基因的入门载体时必须切掉这个基因,接入目的基因。cedB基因两端可以选择的酶切位点有限(2个),同时还必须考虑读码框架、启动子、终止密码等问题因此 Gateway 系统提供了5种不同的入门载体以供选择。需要特别注意的是转化用的菌株必须是不含F附加体的,因为它表达的一种产物能阻断 ccdB 基因,影响筛选结果。

 

GATEWAY技术原理及其应用

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